編者按 8月23日，兩篇發(fā)表在《自然》雜志的論文宣告：科學(xué)家組裝了人類Y染色體的第一個完整序列，補齊了人類基因組這部“生命天書”。多年以來，“生命天書”初稿被科學(xué)家反復(fù)打磨、拾遺補闕。等待了20多年后，Y染色體的完整“章節(jié)”姍姍來遲。而這還只是一個開始，未來，有關(guān)遺傳、生育、疾病、進化的諸多密碼有望被一一破解。

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好消息傳來。美國國家人類基因組研究所領(lǐng)導(dǎo)美國約翰斯·霍普金斯大學(xué)、加州大學(xué)圣克魯斯分校等多家機構(gòu)的科學(xué)家組裝了人類Y染色體的第一個完整序列。這是最后一個被完全測序的人類染色體，新序列填補了Y染色體長度的一半以上的空白。兩篇相關(guān)論文于8月23日發(fā)表在《自然》雜志上。

幾十年來，Y染色體作為人類兩性染色體之一，由于其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，一直是基因組學(xué)界難啃的“硬骨頭”。現(xiàn)在，這一難以捉摸的基因組區(qū)域已經(jīng)被完整測序，這意味著，人類泛基因組的最后一塊“拼圖”被補上了。

這次測序為當前人類參考基因組增加了逾3000萬個堿基對，揭示了多個基因家族的完整結(jié)構(gòu)，并確認了41個新的蛋白質(zhì)編碼基因，為研究生殖、進化和人口變化相關(guān)的重要問題提供了關(guān)鍵信息。

Y染色體測序困難重重

深圳華大生命科學(xué)研究院副院長金鑫在接受科技日報記者采訪時說：“人類基因組測序是理解人類疾病、健康和進化的關(guān)鍵。通過將個體基因序列與參考基因組進行比對，科學(xué)家可以找到與疾病相關(guān)的基因，進而為個體提供更精準的診斷和治療方案。”

深圳華大生命科學(xué)研究院研究員周旸介紹說，完整人類基因組中約有30億個堿基對，科學(xué)家其實很難通過直接測序把序列測通，所以在測序的時候，需要將大片段的DNA進行隨機打斷再進行測序。對于常染色體是如此，對于X和Y染色體亦然。所以在測序結(jié)束后，科學(xué)家需要通過對測序數(shù)據(jù)進行拼接來得到完整真實的基因組序列。

1999年，人類首次成功完成對人體染色體完整基因序列的測定。科學(xué)家使用“短讀長”測序技術(shù)來做到這一點，將DNA切成大約一百個堿基的小片段，然后像拼拼圖一樣重新組裝它們。

2022年，最新版人類參考基因組（T2T-CHM13）問世。該基因組包含22條常染色體和X染色體的無間隙序列，共有30.55億對堿基，比之前的人類參考基因組（GRCh38）增加了近2億堿基對的遺傳信息，約等于整個基因組8%的序列信息，達到了前所未有的完整程度。然而，人類參考基因組中的Y染色體，仍有約一半序列是缺失的。

Y染色體的測序為什么如此棘手？周旸說：“這些未知區(qū)域主要集中在異染色質(zhì)區(qū)域。該區(qū)域主要由微衛(wèi)星序列組成。要通過測序數(shù)據(jù)確定其序列是一件非常困難的事情。”

微衛(wèi)星序列通常屬于重復(fù)序列，是一種在基因組中廣泛存在的特殊DNA序列重復(fù)單元。金鑫表示，由于Y染色體包含大量重復(fù)或“回文”序列，共有多達百萬個堿基對。而“短讀長”技術(shù)無法跨越這么長的重復(fù)序列，從而無法確定正確的序列順序，也就無法繪制出完整序列。

組裝測序數(shù)據(jù)就像嘗試閱讀一本被切成條狀的長書，每一條都是書中的一句話。如果書中的所有句子都是唯一的，那么就更容易確定句子的順序。但是，如果同一句話重復(fù)了數(shù)千或數(shù)百萬次，那么這些句子的原始順序就沒有那么清楚了。Y染色體上約有3000萬個堿基字母是重復(fù)序列，就好像這本書的一半篇幅都重復(fù)著同樣的幾句話。

技術(shù)“組合拳”助力測序

如果把染色體比作一本書，那么被稱為“短讀長”的DNA測序技術(shù)一次只能讀取相對較短的序列，但現(xiàn)在，“長讀長”DNA測序技術(shù)可在不影響準確性的情況下生成更長的DNA序列讀數(shù)，甚至可一次閱讀整個“句子”或“段落”。這樣，研究人員能夠更準確地判斷“句子”“段落”之間的排列順序，從而更有助于完成完整的測序。

得益于“長讀長”DNA測序技術(shù)和創(chuàng)新的序列組裝方法，科學(xué)家們終于實現(xiàn)了對Y染色體的無間隙讀取。

周旸說：“科學(xué)家利用‘長讀長’DNA測序技術(shù)，一定程度上降低了組裝Y染色體的難度。另外，科學(xué)家也針對新技術(shù)的測序數(shù)據(jù)開發(fā)了新的組裝算法進行自動化組裝，提升了組裝效率。”

今年2月，美國國立衛(wèi)生研究院研究人員發(fā)布了一種創(chuàng)新的軟件工具Verkko，用于組裝來自各種物種的真正完整的基因組序列。研究人員稱，有了Verkko，研究人員現(xiàn)在只需按下一個按鈕就能自動獲取完整的基因組序列。

英國《新科學(xué)家》雜志網(wǎng)站8月23日報道，研究人員還運用了英國牛津納米孔公司所開發(fā)的納米孔（Nanopore）測序技術(shù)。當單個DNA分子穿過一個納米孔時，就能讀取該分子的序列，產(chǎn)生數(shù)百萬個DNA堿基字母的片段，而不僅僅是幾百個。

在本次研究中，得益于上述方法，團隊能夠應(yīng)對Y染色體測序中的種種挑戰(zhàn)。

Y染色體上的新發(fā)現(xiàn)

此次發(fā)表的一篇論文稱，Y染色體包含62460029個堿基對序列。該數(shù)字比參考基因組GRCh38里的Y染色體數(shù)據(jù)多了3000萬個堿基對，標志著測序完整性的顯著進步。

通過改進GRCh38中的錯誤并闡明DAZ和RBMY等基因家族的結(jié)構(gòu)（這兩個基因家族都有助于精子的產(chǎn)生），該團隊增進了對Y染色體遺傳結(jié)構(gòu)的理解。

此外，這條完整的Y染色體有106個蛋白質(zhì)編碼基因，比參考基因組多了41個。但幾乎所有這些額外的基因都只是一種被稱為TSPY的基因的副本。他們還辨識出以前被誤解為是細菌DNA的序列，這些序列其實是之前未知的人類Y染色體序列。

在另一篇論文中，包括美國杰克遜基因組醫(yī)學(xué)實驗室在內(nèi)的聯(lián)合團隊組裝了代表世界21個不同人群的43名男性的Y染色體。這些組裝結(jié)果更詳細地闡釋了Y染色體在人類演化歷史中的遺傳差異。研究結(jié)果揭示了新的DNA序列、保守區(qū)域的特征，以及促進Y染色體復(fù)雜結(jié)構(gòu)的分子機制。

金鑫表示，去年公布的T2T-CHM13完整基因組樣本取自一個葡萄胎的單倍基因組（完全性葡萄胎是一種罕見的妊娠并發(fā)癥，由來源于胎盤的細胞異常生長引起），而此次樣本取自健康的人類個體。

上海交通大學(xué)長聘教軌副教授毛亞飛告訴記者，目前來看，這個數(shù)目的樣本已經(jīng)是人類基因組測序上很大的突破。不過，下一步還應(yīng)該選擇更廣泛的樣本，包括不同種族、地理區(qū)域和人群，這樣才能更好地代表全球人類遺傳多樣性，進而有助于揭示人類種群之間的遺傳差異和相似性，從而提供更準確的基因組參考。

完整基因測序意義非凡

Y染色體通常與生理性別為男性的個體相關(guān)聯(lián)，但它也可能存在于雌雄同體者中。盡管Y染色體上的基因相對較少，但這些基因復(fù)雜且處在動態(tài)變化中，并具有編碼精子生成等重要功能。完整的Y染色體參考序列將使科學(xué)家能夠以前所未有的方式更好地研究人類基因組中Y染色體的各種特征。

研究發(fā)現(xiàn)，不同個體含有10到40個TSPY基因拷貝。例如，一名男子的Y染色體有與精子形成有關(guān)的TSPY基因的23個拷貝，而另一名男子則有39個拷貝。現(xiàn)在，科學(xué)家可以使用新的參考圖譜和已建立的Y染色體測序方法更好地研究這種進化。這可能是未來體外受精領(lǐng)域或其他生殖和不孕癥領(lǐng)域的研究焦點。

完整的、無間隙的Y染色體序列對于研究人類群體進化和遷移至關(guān)重要。毛亞飛補充說：“我們與猴子、黑猩猩等有共同的演化線索，通過解析基因組變化，可以了解人類是如何演化而來的。”

“此前，人們其實已經(jīng)根據(jù)Y染色體的基因組草圖定位了許多與雄性發(fā)育、精子生成等過程相關(guān)的基因，也發(fā)現(xiàn)了Y染色體與諸如癌癥等疾病的關(guān)聯(lián)；而最近發(fā)表的Y染色體完整序列將會為探索這些區(qū)域序列的功能提供扎實的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。”周旸指出，“新研究也進一步揭示了個體間Y染色體的差異。這些Y染色體上的變異以及與人類性狀的關(guān)聯(lián)分析將有助于人群演化、遺傳、疾病等方面的研究。”

總之，完整的人類Y染色體將為許多新發(fā)現(xiàn)打開大門。下一步，研究人員計劃通過將Y染色體納入未來版本的人類泛基因組參考圖譜來進一步改善Y染色體的研究。泛基因組是一種新的基因組參考，它將來自不同祖先背景的多個人的基因組信息結(jié)合起來，最終可以實現(xiàn)更客觀的研究和臨床發(fā)現(xiàn)，如幫助診斷疾病、預(yù)測醫(yī)療效果和指導(dǎo)治療等。

受訪專家均相信，目前發(fā)表的Y染色體的組裝結(jié)果只是一個開始。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，總有一天全世界的每一個人都可以對自己的基因進行測序。

金鑫展望道：“現(xiàn)在，我們?nèi)メt(yī)院都是做血常規(guī)、尿常規(guī)等檢測，未來有了臨床基因測序技術(shù)后，我們可能要先做個基因常規(guī)檢測，把最主要的遺傳信息跟疾病的關(guān)系、藥物的禁忌都先了解清楚，醫(yī)生再對癥下藥。所以，基因組測序會對整個人類，尤其是對了解我們自身的健康起到非常重要的作用。”

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